1、將一個單克隆抗體與固體載體連接,形成固體單克隆抗體。清洗人抗體ELISA試劑盒以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
2、同時加入待測樣品和酶標單抗進行孵育。待測抗原與固體McAb和酶標記的McAb反應(yīng),形成雙抗體夾心復合物。清洗以去除松散物質(zhì)。
3、添加基材以顯色。
一些適用于雙抗體夾心法的ELISA試劑盒也可以通過雙位點一步法檢測。例如,HBsAg也可以通過這種方法檢測。原理是:將純化的抗-HBs吸附在固相載體表面,加入待測血清(或血漿),再加入另一種用辣根過氧化物酶標記的抗-HB(酶綴合物)。如果血清或血漿中含有HBsAg,通過孵育形成固相McAb-HBsAg酶標記的McAb復合物,加入底物,通過顯色反應(yīng)進行測定。
1、吸液速度太快不容易避免氣泡,吸液量不夠準確。
2、將所有液體加入酶標簽孔后,將酶標簽板放在桌子上,平行輕輕搖晃30秒,使液體充分混合并充分反應(yīng)。
3、在培養(yǎng)過程中,應(yīng)使用酶標記板密封蓋板膜,以防止水分蒸發(fā),并防止曲線偏離線性。
4、由于底物顯色劑對光敏感,應(yīng)遠離光儲存。
5、每次手動洗板時加入洗滌液后。人抗體ELISA試劑盒應(yīng)靜置15~30秒。不要將一個酶標記L中的洗滌液濺到另一個酶標志孔中,以防止交叉污染。抖掉洗滌液,用毛巾或吸水紙輕拍酶標簽板。